广西优质茶叶交流组

中韩联合研究实验显示:白茶具有很强的抗突变和抗癌效果

楼主:御芳茗 时间:2022-01-29 15:51:06


本实验对两种绿茶和两种白茶进行抗突变和体外抗癌效果评价。采用Ames实验对绿茶和白茶的抗突变特性进行比较,得出白茶的抗突变效果好于绿茶的结果。通过MTT实验验证其抗癌效果。在400μg/ml浓度处理下,白牡丹和白毫银针表现出对AGS和HT-29癌细胞的生长抑制效果好于龙井绿茶和云雾绿茶。由此得出,白茶的抗突变和体外抗癌效果好于绿茶。


作者单位


重庆大学化学化工学院;

釜山国立大学食品科学与营养学科


关键词


白茶 绿茶 抗突变 体外抗癌




白茶是我国的特种茶,是我国传统的六大茶类之一,我国是世界唯一产地。主产于福建的福鼎等县。因制法独特,不炒不揉,成茶外表满披白毫,色泽银白灰绿,故称“白茶”。白茶依采摘标准不同分为银针、白牡丹、贡眉和寿眉。传统上,将采自大白茶或水仙品种嫩梢的肥壮芽头制成的成品称“银针”。采自大白茶或水仙品种嫩梢的一芽一、二叶制成的成品称“白牡丹”或“水仙白”。白茶以性清凉、退热、降火、祛暑的治病效果和清幽素雅的风格,在国内外市场素负声誉,尤受侨胞的喜爱。关于绿茶抗癌作用已经引起人们的充分重视并且进行了相关研究。白茶作为一种类茶饮品,其在抗突变和抗癌方面的研究比较少,为了验证白茶的抗突变和抗癌效果,本实验对白茶和绿茶进行了分析和比较。




材料与方法

1.1 材料与试剂

白茶:福建某茶业有限公司出品的白牡丹和白毫银针白茶




绿茶:杭州某茶总公司的西湖龙井绿茶和杭州某茶叶有限公司的云雾绿茶


西湖龙井



云雾绿茶


DMSO  日本纯正化学株式会社;D-Biotin、Lhistidine·HCl (monohydrate)、D- glucose-6-phosphate(mono sodium salt)、NADP (sodium salt)  美国Sigma公司;RPMI 1640培养液、Fetal bovine serum (FBS)、0.05% trypsin-0.02% EDTA、100 unit/ml Penicillin- Streptomycin  美国Gibco公司。

1.2 致突变物

N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitroN-nitrosoguanidine,MNNG)  美国Aldrich Chemical公司。

1.3 标准菌株

鼠伤寒沙门菌营养缺陷型菌株TA100(碱基置换型)是由美国加州大学Ames教授提供。

1.4 癌细胞株

AGS胃癌细胞株(AGS,human gastric adenocarcinoma cell)、HT-29结肠癌细胞株(HT-29 human colon carcinoma cell)是由韩国细胞株银行(韩国首尔国立大学医学院)提供。

1.5 仪器与设备

R-114旋转蒸发仪  瑞士Buchi公司;HB-205SW恒温水浴振荡器  韩国Hanbeak科学株式会社;VS-15CFN冷冻离心机  韩国Vision科学株式会社;IB-600M培养箱  韩国Jeiotech株式会社;MCO96二氧化碳培养箱日本三洋电机株式会社;HB-402V超净工作台  韩国Hanbeak科学株式会社;PM-10AK倒置显微镜日本奥林巴斯株式会社;Elx800酶标仪  美国Bio Tekinstruments公司。

1.6 方法

1.6.1 Ames实验

将样品冷冻真空干燥后粉碎,加入样品20倍(W/V)量的乙醇12h搅拌提取,反复3次提取后把3次提取液混合后过滤,滤液蒸干得到乙醇提取物。提取物用DMSO溶解稀释到200mg/ml保存备用。

根据加州大学Ames教授所建立的利用的鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型菌株TA100回复突变实验,采用平板掺法,计算回变菌落数。实验每个样品设两个剂量组,1.25mg/皿和2.5mg/皿,同时设自发回变组和对照组,每组3个平行皿,实验结果以抗突变抑制率表示。在经过干热灭菌的试管中加入磷酸盐缓冲液、12h培养的菌株(1×109~2×109cells/ml)0.1ml、按所需浓度稀释的样品溶液50μl和致突变物50μl。轻微振荡后在37℃下进行30min预培养后加入融化的并在45℃水浴中保温的顶层培养基2ml,迅速混合,倒在预先准备好的底层培养基上,37℃培养48h观察结果。  

    对照组菌落数-样品处理组菌落数

抑制率(%)=———————————×100

    对照组菌落数-自发回变组菌落数

1.6.2 MTT法癌细胞体外增殖抑制实验

将AGS胃癌细胞接种于含10%灭活小牛血清的RPMI 1640培养液中,在5% CO2、37℃充分湿化条件下的培养箱中培养,每周更换2~3次培养基,6~7d传代一次。将培养的癌细胞按浓度1×104cells/ml接种于96孔培养板,每孔180μl。5% CO2、37℃充分湿化条件下培养24h。细胞贴壁后按每孔20μl 加入样品。孔内实验时,每个样品设两个剂量组,分别为200μg/ml和400μg/ml。48h培养后。每孔加入20μl MTT试剂(浓度为5mg/ml)继续培养4h,结束培养后吸弃孔内上清液后,按每孔150μl 加入DMSO后振荡30min,540nm波长下用酶标仪测定各孔OD值并计算细胞增殖抑制率。

               OD空白孔-OD样品孔

抑制率(%)=—————————×100

               OD空白孔




结果与分析


2.1 白茶和绿茶抗突变作用实验结果






由表1可知,样品的乙醇提取物对MNNG诱导TA100具有一定的抑制作用。以浓度1.25mg/皿样品处理时白牡丹、白毫银针、龙井绿茶和云雾绿茶的抗突变抑制率分别为65%、68%、57%和46%;浓度2.5mg/皿样品处理时抑制率分别为77%、84%、77%和75%。样品对MNNG致突变物的抗突变实验结果表明,白茶的抗突变效果略强于绿茶并且各类茶中价格高、品质优的抗突变效果强于价格低的。

2.2 白茶和绿茶对癌细胞体外增殖抑制实验结果


由表2实验结果显示,白茶和绿茶样品对胃癌细胞和结肠癌细胞增殖均有一定的抑制作用。样品对AGS胃癌细胞处理时,在400μg/ml浓度样品处理下,白茶表现出了很强的抑制效果,白牡丹抑制率达到84%和白毫银针96%,绿茶则同样表现出了较强的抑制率,分别为龙井绿茶91%和云雾绿茶77%;在200μg/ml浓度样品处理下白牡丹、白毫银针、龙井绿茶和云雾绿茶也具有一定的抑制率,分别为55%、76%、62%和55%。样品对HT-29结肠癌细胞处理时表现与样品对AGS胃癌细胞处理时相似的效果,在400μg/ml浓度样品处理下两种白茶白牡丹(62%)和白毫银针(84%)的抑制率从整体上略高于龙井绿茶(70%)和云雾绿茶(51%),在200μg/ml浓度样品处理下四种样品的抑制率分别为22%、50%、27%和19%(表2)。由此可见,白茶对两种癌细胞的增殖均具有一定的抑制效果,体外抗癌效果略强于绿茶并且各类茶中价格高、品质优的抗癌效果强于价格低的。




讨论

现在对白茶抗癌作用的研究已经取得了一定成效,Nakachi等和Fujiki等对绿茶在癌症预防和抗癌方面均进行了研究,对于白茶的抗癌研究还刚起步。本实验以绿茶为基准,对两种杭州地区出产的绿茶和福建出产的两种代表型白茶进行抗突变和抗癌效能比较实验,得出白茶具有很强的抗突变和抗癌效果,所以将白茶作为一种保健饮品推广是很具有价值的。




参考文献


[1] 袁弟顺, 郑金贵. 白茶的研究进展[J]. 福建茶叶, 2007(2): 2-4.

[2] 池玉洲. 福建白茶的基本特性及其药理作用[J]. 福建茶叶, 2007(2):46-47.

[3] MARON D M, AMES B N. Revised methods for Salmonellamutagenicity test[J]. Mutat Res, 1983, 113: 173-215.

[4] AMES B N, MCCANN J, YAMASAKI E. Methods for detecting carcinogens and mutagens with the Salmonellamammalian-microsomemutagenicity test[J]. Mutat Res, 1975, 31: 347-364.

 [5] SKEHAN P, STORENG R, MONKS S A, et al. New colorimetriccytotoxicity assay for anticancer-drug screening[J]. J Natl Cancer Inst,1990, 82: 1107-1112.
[6] PARK J G, KRAMER B S, STEINBER C J, et al. Chemosensitivitytesting of human colorectal carcinoma cell lines using a tetrazoliumbased colorimetric assay[J]. Cancer Res, 1987, 47: 5875-5879.
[7] ZHAO X, BAK S S, RHEE S H, et al. Fermentation period influenceson antimutagenic and in vitroanticaner effects of Shuidouchi[J]. CancerPrevention Res, 2008, 13(1): 40-46.
[8] NAKACHI K, MATSUYAMA S, MIYAKE S, et al. Preventive effects of drinking green tea on cancer and cardiovascular disease: Epidemiological evidence for multiple targeting prevention[J]. BioFactors, 2000, 13: 49-54.
[9] FUJIKI H, SUGANUMA M, IMAI K, et al. Green tea: cancer preventive beverage and/or drug[J]. Cancer Lett, 2002, 188: 9-13.



文章来源:核心期刊《食品科学》
作者简介:
王刚,重庆大学化学化工学院,重庆,硕士研究生,研究方向为食品安全。
赵欣,釜山国立大学食品科学与营养学科,韩国 釜山


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